双孢菇是喜欢冷凉气候的菌类。双孢菇和温度的关系，大体上可分为菌丝体和子实体两个阶段。
双孢菇担孢子释放温度为18～20℃，温度超过27℃或低于14℃，即使子实体已成熟，也不能散发孢子。双孢菇担孢子萌发温度为23～25℃，环境条件适宜，担孢子7～12天萌发。温度过高或过低，都会延迟担孢子萌发。
双孢菇菌丝体生长的有效温度范围是5～33℃，22～26℃菌丝生长速度快，粗壮浓密，生活力强；5℃以下双孢菇菌丝体生长极其缓慢，低于18℃菌丝短而浓密，但生长速度较慢；高于28℃菌丝生长纤细无力，33℃以上菌丝体则停止生长。
双孢菇子实体发育温度范围为4～23℃，最适温度为13～16℃，在此温度条件下长出的蘑菇，菌盖肉厚致密，菇体较重，柄短，产量高，质量好。温度低于12℃，双孢菇子实体生长速度慢，出菇少，菇大而肥厚，组织致密，单菇虽重但产量降低。
当室温低于5℃时，子实体停止生长。温度高于19℃子实体生长速度快，菌柄细长，肉质疏松，易产生薄皮开伞菇，品质低劣。当室温持续几天在22℃以上时，会引起大面积菌蕾枯萎死亡。
在子实体形成期间，温度只能下降，不可回升，否则会造成大量死菇。这是因为双孢菇菌丝体相当于相通的“管子”，在温度较低时，菌丝体扭结，形成菌蕾。所需的水分和营养，借菌丝体中原生质的流动集中运往菇蕾，供其生长发育。
如果此时温度突然回升，菌丝体又把供应菇蕾的营养返回给周围的菌丝体，供其蔓延生长，造成营养物质倒流现象，大批菇蕾失去营养而枯萎死亡。
